摘要：通过对钼锑抗分光光度法测定总磷的标准曲线和工作曲线的比较试验，并应用数理统计方法对结果加以分析，证明总磷测定中标准曲线与工作曲线无显著性差异（显著性水平为0.05，样本数为6），且两者具有相似的精密度和准确度。
关键词：总磷测定；校准曲线；数理统计分析；t检验
Comparison between the standard curve and the working curve in monitoring TP
Abstract: By making a comparison between the standard curve and the working curve in monitoring TP, and analyzing the results by mathematical statistics ,It is proved that there is no noticeable difference between the standard curve and the working curve ( is 0.05 and the number of samples is 6), and the two methods have similar precision and accurary.
Key words: monitoring TP; calibration curve; mathematical statistics; t test
校准曲线是描述待测物质浓度或量与相应测量仪器响应值或其他指示量之间的定量关系曲线。校准曲线包括工作曲线（绘制标准曲线的溶液需与样品分析步骤完全相同）和标准曲线（标液的分析步骤有所省略，如不经过前处理等）。今通过试验，并经数理统计检验总磷测定中标准曲线和工作曲线间有无显著性差异。 1
实验部分
1.1 试剂
5%（m/V）过硫酸钾溶液 ；（1：1）硫酸；10%（m/v）抗坏血酸溶液；钼酸盐溶液；磷酸盐储备溶液；磷酸盐标准液
上述溶液均按文献[1]配制。
1.2 仪器
760CRT双束紫外可见分光光度计（上海科学精密仪器有限公司）；医用蒸汽灭菌锅；玻璃器皿，所用的玻璃器皿用（1+5）盐酸浸泡2h，用水冲洗数次。
1.3 实验操作方法 1.3.1 标准曲线的绘制
向系列50ml比色管中分别加入0、0.50、1.00、3.00、5.00、10.0、15.0ml磷酸盐标准液，用水稀释至50ml标线，制得标准系列溶液，向标准系列溶液中加入显色剂（1ml10%（m/v）抗坏血酸溶液、2ml钼酸盐溶液），15min后比色，由比色结果拟合计算出标准曲线。 1.3.2 工作曲线的绘制
向系列50ml比色管中分别加入0、0.50、1.00、3.00、5.00、10.0、15.0ml磷酸盐标准液，用水稀释至25ml标线处，加过硫酸钾溶液4.00ml，加塞后管口包一纱布并用线扎紧，以免加热时玻璃塞冲出，将具塞比色管放在烧杯中置于高压灭菌锅中加热，待锅内压力达1.1kg/cm2(相应的温度为120℃)时，调节电炉温度使其保持此压力30min后，停止加热，待压力表指针降至零后取出放冷，用水稀释至50ml标线，制得标准系列溶液，向标准系列溶液中加入显色剂（1ml 10%（m/v）抗坏血酸溶液、2ml钼酸盐溶液），15min后比色，由比色结果拟合计算出工作曲线。 1.3.3 重复性试验
选一具有代表性的水样，经高温高压过硫酸钾溶液消解的预处理后，分别用两条曲线进行测定，并以工作曲线测定的结果作为参照，计算相对误差，再通过数理统计方法判断两组数据的一致性，结果见表2。 2
分析结果与讨论
2.1 标准曲线与工作曲线的测定结果
通过上述(1.3.1、1.3.2、1.3.3)步骤，总磷测定中标准曲线与工作曲
线的测定结果见表1。
表1：标准曲线与工作曲线的测定结果
Tab.1 The results of the standard curve and the working curve 序号 1 2 3
钼锑抗分光光度法 4 5 6
2.2 重复性试验结果
表2：测定水样中总磷含量的重复性试验结果
Tab.2 The results of repeatability test in monitoring TP
总磷含量的平行测定结果（mg/l）
相对误
校准曲线
1
2
3
4
5
6
均值
（%）
标准曲线 4.81 4.91 4.96 4.91 4.91 4.91 4.90 工作曲线 4.98 5.08 5.14 5.08 5.08 5.08 5.07 2.3 讨论
2.3.1 两条曲线斜率的一致性检验
对表1中结果进行t检验。
假设H0：μ1 = μ2（双侧检验）（μ为总体均值）
由表1测定结果进行统计计算可得标准曲线与工作曲线的斜率的差的均值
d = [∑（xi- yi）]/n = 0.1933 （n为样本数）
标准偏差Sdi = ｛[∑di2－（∑di）2/n]/（n－1）｝1/2 = 0.4775
4.92 5.16
-3.35
标准偏差
差（%）
51.83 51.91 51.74
51.80 52.00 51.22
测定方法
标准曲线的斜率（xi）
51.60 51.90 51.97
工作曲线的斜率（yi）
52.55 52.30 51.82
均值的标准偏差 Sd = Sdi/n = 0.1949 自由度 f = n －1 = 5
统计量 t = （│d│－ 0）/ Sd = 0.9916
判定：对于给定的显著性水平α为0.05，自由度为5时的统计量t0.05(5) = 2.571，而我们研究的对象︱t︱= 0.9916 ＜ 2.571 = t0.05(5) ，故不拒绝假设H0，即可认为两种方法测定的曲线无显著性差异。 2.3.2 重复性试验中测定结果的一致性检验
对表2中测定结果进行分析，检验σ1 = σ2（σ为总体标准偏差），同样进行t检验。
假设H0：μ1 = μ2（双侧检验）（μ为总体均值） 令 x1 = 4.90，x2 = 5.07 （x为样本均值）
S12 = 4.922 = 24.21 ，S22 = 5.162 = 26.63 （S为样本标准偏差） 自由度 f = n1 + n2－2 = 10 (n为样本量)
统计量 t = （x1－x2）[n1 n2 f/（n1+ n2）]1/2[（n1－1）S12 +（n2－1）
S22]－1/2
= （4.90－5.07）[6×6×10/（6 + 6）]1/2（5×24.21 + 5×26.63）－
1/2
1/2
-3
= －3.4×10
判定：对应的显著性水平α= 0.05查表得显著性水平α为0.05，自由度为10时的t0.05(10) = 2.228。试验中所得的统计量︱t︱= 3.4×10 ＜ 2.228 = t0.05(10) ，故不拒绝假设H0，即可认为两种方法测定结果间无显著性差异，且具有相似的精密度和准确度。 3 结论
在总磷测定中，总磷标液经消解和不消解绘制成的曲线，即工作曲线与标准曲线相比，其斜率间无显著性差异（显著性水平为0.05，样本数为6），且应用两条曲线测定的结果具有相似的精密度和准确度。由此看来，
-3
总磷标液系列的高温高压过硫酸钾消解操作步骤可以省去，即采用钼锑分光光度法测定总磷时，可以使用标准曲线代替工作曲线。
[参考文献]
[1] 国家环境保护总局《水和废水监测分析方法》编委会.水和废水监测分析方法[M].第四版，北京：中国环境科学出版社，2002.244-248. [2] 中国环境监测总站《环境水质监测质量保证手册》编写组.环境水质监测质量保证手册[M].第二版,北京:化学工业出版社,1994.262-266.
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